Caracterización de isoformas de la enzima B-esterasa carboxilesterasa, en explantos de placenta expuestos a clorpirifós y a una de sus formulaciones comerciales

Abstract

Las mujeres embarazadas residentes en zonas rurales del Alto Valle de Río Negro y Neuquén se encuentran ambientalmente expuestas a plaguicidas de uso agropecuario. Considerando que la placenta es un órgano impactado por estos tóxicos, se estudió la respuesta placentaria a la exposición a xenobióticos utilizando explantos de placenta. Los mismos provienen de placentas a término y representan un escenario más cercano al que ocurre en la exposición in vivo de las mujeres. En este trabajo de Tesis se decidió investigar si en los explantos de placenta se altera la actividad de la enzima carboxilesterasa (CES), blanco secundario de toxicidad de los organofosforados (OFs), cuando se exponen in vitro a clorpirifos (CP) y su formulado comercial Lorsban® (LB). Como en la placenta se han identificado la presencia de las isoformas humanas CES1, CES2 y CES3, en el presente trabajo también se abordó la caracterización y el estudio de estos transcriptos mediante la técnica RT-PCR. Los resultados demuestran que la actividad y expresión de CES en explantos de placenta se ve afectada por la exposición al OF CP, principalmente por su formulado comercial LB. Mediante la utilización de geles no desnaturalizantes de poliacrilamida, se observó que LB inhibe la actividad de CES prácticamente a todas las concentraciones ensayadas a 24 hs de exposición. En contraste, a 48 hs de exposición, se observa muy poca actividad enzimática, por esta técnica, tanto en los controles como en los tratamientos. Por otra parte, se determinó que tanto CP como LB modulan la transcripción de CES1 a altas concentraciones a 48 hs de exposición. En el análisis de la expresión de CES2 no se observaron cambios. Por último, en el estudio no se encontró expresión de CES3. La disminución de la actividad de CES en los explantos supone que estos compuestos llegan y se bioactivan en la placenta, lo que produciría una afección en el normal desarrollo del embarazo. Por otro lado, la modulación de CES1 indicaría que estos compuestos además de inhibir farmacológicamente estas enzimas, son capaces de inducir su transcripción génica. PALABRAS CLAVE: plaguicidas organofosforados, clorpirifos, formulado comercial, explantos, placenta, carboxilesterasa.